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生物样品中氨基酸含量检测

一、实验原理

   东标检测中心参照国标GB/T 5009.124-2003食品中氨基酸的测定,试样蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经氨基酸自动分析仪的离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应,再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。

二、仪器和试剂

   L-8900氨基酸自动分析仪,DHG-9203J型恒温干燥箱,DZF-6050型真空干燥器,真空泵;高纯氮气(纯度为99.99%)。

三、试验方法

1、称样

   样品经粉碎后,用电子天平准确称量样品,精确到0.0001g(使样品蛋白质含量10mg~20mg范围内),将称好的样品放于水解管中。

2、水解

   在水解管中加入6mol/L盐酸15mL,加入新蒸馏的苯酚3~4滴,再将水解管放入冰水中,冰冻3~5min,再接到真空泵的抽气管上,抽完真空后冲入高纯氮气;再抽真空充氮气,重复三次后,在充满氮气的状态下封口。将已封口的水解管放在110℃±1℃的恒温干燥箱内,水解22h后,取出,冷却。

   打开水解管,将水解液过滤后,用去离子水多次冲洗水解管,将水解液全部转移到50mL容量瓶内,用去离子水定容,吸取滤液1mL于5mL容量瓶内,用真空干燥器在40℃~50℃干燥,残留物用1~2mL水溶解,再干燥,反复进行两次,最后蒸干,用1mLpH2.2的缓冲液溶解,供仪器测定用。

四、结果计算与评价

   青岛东标检测中心利用外标法计算各种氨基酸含量。


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